这年夏天，巴斯德正在紧张研究鸡霍乱的时候，接到家里的来信，信中 说他的女儿已经订婚，就要结婚了。巴斯德心中十分高兴，决定回去给女儿 办婚事。他向助手鲁和尚贝朗交代了工作以后，就回家去了。
两位助手按照巴斯德吩咐，天天接种一次新培养液，给鸡注射一次，记 录鸡的患病情况。有一天，两位助手决定去度假。他们把一瓶鸡霍乱的肉汤 培养液放在碗柜里，锁上实验室的门就去了。过了些日子，巴斯德和助手们 都回来了。尚贝朗取出碗柜里的鸡霍乱培养液给一只鸡注射了。第二天，意 外的事情出现了，这只鸡竟然没有发病，仍然活蹦乱跳地活着。
两位助手商量了这件事：看来那瓶培养液过期了，我们还是到鸡场去要 一只病鸡，重新培养新鲜的鸡霍乱菌吧。这件事可不能让巴斯德老师知道。 他们知道巴斯德老师严格认真，一丝不苟，这件事要是让老师知道了，非吃 一顿批评不可。他们决定“保密”。
他们制成了新鲜鸡霍乱菌的培养液。第二天，他们用新制的培养液，给 一些鸡注射了。惊人的事情发生了。所有的鸡都象往常一样，得病死亡，只 有一只例外！经过仔细核对，正是那只注射过“无效”的过期培养液的鸡。
“这是怎么回事呢？”巴斯德问助手。两位助手低下了头。尚贝朗把事 情的经过如实地说了出来，请求老师处罚他们。巴斯德没说什么，低头沉思。 他没有责备两位助手。突然，巴斯德跳了起来，喊道：“我明白了，那只鸡 有抵抗力，所以它没有死。把这瓶培养液留下来，不能倒掉！”
巴斯德仔细地思考着过期的鸡霍乱菌为什么会使鸡有免疫力——也就是 不得病，有抵抗力。他又从患有鸡霍乱的病鸡血中重新分离，培养出病原菌， 并买来一批鸡做试验。鉴于上次试验的结果，他把未感染病的和新买的鸡分 成四组。新鸡和老鸡两组都注射新制成的的培养液，另两组分别注射保存的 培养液和新制成的培养液。试验的结果是：注射过保存培养液的鸡群，抵抗 住了新制的培养液中病原菌的攻击；与此相反的试验组，鸡都患病死了。
这次试验结果同假期归来后试验结果为什么不同呢？巴斯德想，除去培 养液放置时间长外，也许还有别的什么原因。经过反复试验和验证，巴斯德 发现，如果让培养液长期暴露在空气中，鸡霍乱菌就会失去致病的能力，其 毒力减弱了。用减毒病原菌注射后的鸡，产生了对强毒病原菌抵抗的能力。
巴斯德继续研究引起病原菌毒力减弱的原因。他发现这与两次传代培养 间隔时间长短有关，间隔的时间越长，减毒程度就越大。他刊登在《医学科 学院学报》上第一篇探讨鸡霍乱病文章说，鸡霍乱也能以毒力减弱的状态存 在，它能诱发病症，但不造成死亡，用减毒病原菌注射的动物复原后，即使 用强毒的病原菌接种，也能存活下来。巴斯德把减毒的鸡霍乱菌株称为“疫 苗”，这个名词一直沿用到今天。
从这里开始，巴斯德又重新来研究炭疽杆菌。他用同样的方法，想制出 炭疽杆菌的疫苗，给牛、羊、马预防炭疽病。可是他失败了。他仔细的思考 着：为什么对鸡霍乱菌有效的办法对炭疽杆菌却无效呢？除去时间的长短、 与空气接触不接触外，与温度是不是也有关呢？
巴斯德把培养箱的温度提高到45℃，炭疽杆菌就变成芽孢。这时候，它 的抵抗力极高，在滚开的水里煮它，它还能活十分钟；如果干热烧到100℃ 还能活一小时；而放在干燥地方，竟能活许多年，使牛、羊得炭疽病。可是， 如果把温度调整到42—43℃之间，它就不会产生芽孢，而且危害牛羊的作用 也变小了，可以做为疫苗给牛、羊接种防病。他这样做了多次试验，证明能 预防炭疽病。
在完成炭疽病的研究之后，巴斯德又开始研究另一种给畜牧业带来巨大 损失的牲畜疾病猪丹毒，就是猪霍乱。
巴斯德的助手L·蒂利埃于1882年在维埃纳省从病猪体内分离出一种微 生物。为了证明这种微生物与猪霍乱之间的关系，并寻求治疗的办法，巴斯 德和他的助手于9月到达博莱纳，进行研究试验。
11月，巴斯德在给法国科学院的报告中写到：猪丹毒，即猪霍乱，病原 菌是一种象“8”的微生物，很容易在体外培养。这种微生物可使兔子和绵羊 患病和死亡，但不能感染鸡。所以它与鸡霍乱的病原菌不同。用少量病原菌 的菌液感染猪，可迅速发病和死亡。用减毒病菌能很快制成新的疫苗。
巴斯德用兔子传代猪霍乱病原菌，几代后便得到了无致病作用的疫苗。 在1886——1892年，用这种疫苗接种了10万多头猪。
巴斯德抓住一件偶然的事件，认真思考，敏锐观察，周密试验，终于取 得了战胜传染病的划时代成就——创立了免疫学！
1882年，巴斯德被选为法国研究院院士，被选为研究院院士是学者的最 高荣誉。
1883年，法国内阁提议，作为国家褒奖，把1874年巴斯德1.2万法郎 年薪，增加到2.5万法郎，还成立了一个委员会，对巴斯德的贡献作出评价。 评价报告的起草人贝尔写道：“巴斯德的贡献主要是3项伟大的发现：第一， 每种发酵都是由一种特殊微生物生命活动的结果。第二，各种传染病都是由 一种特殊微生物，在生物体内生命活动的结果。第三，把一种传染病的微生 物在某种不利于生长条件下培养，就可以减弱其致病力，把病原菌变成了预 防疫苗。”
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