之后的一段时间，由于工作原因，毛泽东、周恩来两人的合作开始逐渐密切起来。
毛泽东当时除了主持国民党中央宣传部工作，还兼任《政治周报》主编。在《政治周报》第三期刊登的《东征纪略》上，记述了第二次东征时周恩来任东征军总政治部主任及其在追悼攻克惠州牺牲将士大会上的演说。
投桃报李，周恩来派人接管汕头《平报》并改名为《岭东民国日报》后，在该报副刊《革命》发表了毛泽东撰写的文章《国民党右派分离的原因及其对于革命前途的影响》。
1926年3月，蒋介石发动了中山舰事件。
当时，很多人对形势变化感到意外，但毛泽东、周恩来二人却显示出了近乎一致的高度的预见性和政治敏锐性。事件发生后，毛泽东认为这是一个严重的反革命信号。周恩来闻讯后则立即来到广州造币厂，向蒋介石提出质问，反被蒋软禁了一天。
之后，两人来到国民革命军第二军副党代表李富春家中同大家讨论对策。 然而，因为种种原因，毛泽东、周恩来的正确主张却没有被采纳，陈独秀接受了蒋介石的条件：共产党员退出第一军，不退的要交出名单。
中山舰事件算得上是毛泽东、周恩来两人在重大事件上的第一次合作。两人对时局的判断准确一致，显示出政治家的敏锐头脑。不同的是，周恩来在这个事件上更为灵活，尽管他不赞同与蒋介石言和，但对于下一步的打算，他认为“究竟怎么处理，要由党中央决定”。在毛泽东、周恩来后来半个世纪的合作中，这一风格贯穿始终。
所幸的是，中山舰事件后，毛泽东成了国民党第六届农民运动讲习所的负责人。在农讲所亲自讲授《中国农民问题》和《农村教育》课程，并邀请周恩来、肖楚女、彭湃等同志到农讲所授课。毛泽东、周恩来两人的合作关系继续延续下来。
期间，毛泽东、周恩来与两广区委共同研究，从黄埔军校第四期学生中选调了几十名干部，到农讲所经过短期培训，派往广东各县担任领导农民武装的工作。为中国共产党在大革命失败后，转到以农村为基础组织工农革命武装，建立革命根据地，创造了有利条件。
11月份，第六届农讲所结束后，毛泽东到上海担任中共中央农委书记。而周恩来也因为在黄埔军校和国民革命中的突出表现，被调到上海，进入中央工作。1927年3月，在北伐的国民革命军临近上海的情况下，周恩来成功地领导了上海工人第三次武装起义，并因此被任命为中共中央军事部部长。5月29日，中央政治局常委会议决定周恩来代理中央常委职务，参加中央核心领导，周恩来由此成为中共中央的主要领导人之一，也成为毛泽东、周恩来、朱德三人中第一个进入政治局的人。
广州初会(2)
从毛泽东和周恩来1926年1月第一次共同出席国民党第二次全国代表大会，经过不到一年的合作，由于大革命形势发生逆转，两人又各在自己的领域为党的建设发挥着作用，直到再次握手。
在此期间，八一南昌起义爆发了。
南昌暴动
南昌起义是朱德和周恩来之间的第一次真正意义上的合作，朱德和周恩来也许没有想到，在他们分别后的第二次相会，将开创中国革命史上一个新的历史阶段。也正因为有了南昌起义，才会有后来的朱毛会师。
在德国加入共产党后，1925年朱德又转赴苏联学习军事。1926年夏天回到国内，利用旧关系到川军中动员杨森部协助国民革命军北伐，秘密进行共产党的工作。
1927年7月27日，在南昌花园角2号寓所，朱德正在焦急地等待着一位重要人物的到来，来人将带来在南昌发起行动的部署方案，这个人就是5年前介绍他入党的周恩来。
这是朱德一年内第二次进出南昌了。
早在1月份，按照中共中央的安排，朱德率原第二十军军官考察团的多名成员来到南昌，转到第三军开展工作。由于驻守南昌的国民党第五方面军总指挥朱培德、第三军军长王均等人都是朱德在云南陆军讲武堂的好友，朱德被任命为第三军军官教育团团长、第五方面军总参议、南昌公安局局长、警备卫戍司令。蒋介石发动“四一二”政变后，朱德辞去公安局局长、警备卫戍司令等职，于6月中旬离开南昌。
7月15日，汪精卫叛变革命，中共中央做出在南昌举行暴动的决定。21日，朱德重返南昌花园角2号，进行暴动前的准备工作。
朱德利用各种关系，很快弄清了南昌及附近的兵力部署以及设防与火力配备情况，并秘密绘制了敌军分布图，详细地标出了街道、地名和兵力、番号、碉堡、火力配备等。对朱德而言，这是他作为共产党员第一次参与军事活动，兴奋与激动在所难免。
周恩来是从5月下旬起开始负责主持中共中央军事工作的。他曾在4月份，起草致中共中央意见书，强调趁蒋介石东南政权没有稳固之际，“下决心讨伐，迅速出师，直指南京”。6月17日和20日，又先后两次提出湖南暴动计划，但因共产国际代表罗易的反对，计划没能实行。
7月27日晚，周恩来到达朱德的寓所。老友相见，分外亲热。朱德详细地向周恩来汇报了南昌军队的情况。看到朱德绘制的兵力图，周恩来满意地说：“这份兵要图绘得好极了。你为南昌暴动立了头功！”
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