蒋于4月3日在欢迎汪归国的欢迎词中表示拥护汪领导军政一切，军政、民政、财政、外交均听汪精卫的指导。蒋还特别劝汪不要到武汉去。他对汪说：“你如果直正为本党，那就要到南京去，然后再请武汉一般中央执行委员过来。如果你到武汉去，你还是要作本党的罪人。”蒋是想利用汪精卫将武汉中央委员拉过来，使他的未来改府合法化。
但汪因为忌恨蒋的“三·二〇”政变，无论如何不肯与蒋合作，决心到武汉主持工作，然后慢慢排除中共势力，独握中枢再伺机与蒋决战。这是汪的心计，并未形诸笔口。以至于吴稚晖急得跪在汪面前，求汪留在南京。汪见吴跪，吓得赶紧避开，嘴里还不住地说：“吴老，你是老前辈，这样来，我受不了，我受不了！”会场非常紧张，而又令人啼笑皆非。汪始终不肯留在南京。
4月5日，正当汪与各中央监委开会时，报纸忽然登出了《国共两党领袖汪兆铭、陈独秀联合宣言》。该宣言表示国共两党合作到底，绝不受人离间、中伤。此宣言一出，与会人士大哗，吴稚辉尤其气愤，当面挖苦汪以党魁自居，无人认可，也无此资格，说得汪极为难堪！汪氏至此，惟有赴武汉一条路了。汪遂赴武汉，出任国民政府主席。
4月7日，武汉召开紧急会议，鲍罗廷主张先进驻南京，以南京为首都。但蒋介石已于4月9日抢先入驻南京。蒋又先了一步。同日，白崇禧任上海戒严司令，一切由白具体执行。李济深：黄绍竑也电粤、桂两省实行“清党”，屠杀共产党员。
与此同时，南京中共党组织则于4月10日召开南京市民肃清反动分子大会，决议将反动分子交人民审判。会后，到蒋的总部请愿。
这几天，蒋在读曾国藩著作，当他读到“谤怨沸腾，万口嘲讥”时，十分动情，大有古今同叹之概。
蒋于11日，断然下令全国开始“清党”。12日上午，上海在白崇禧指挥下，开始解散工人纠察队，搜查工人俱乐部等，并逮捕和枪杀共产党员。至13日数万工人为此进行抗议游行。当大队到达宝山路时，周风岐第二十六军第二师，突然用机枪向游行队伍扫射，当场打死三、四百人，伤者无数。两广、浙、闽、苏、皖、湘、鄂等省也开始大量屠杀中共党员，不计其数。
蒋介石对杨虎、陈群说：“凡可以杀的，一律杀，宁可错杀，不可错放”。
这就是“四·一二”大屠杀。至此，蒋已完令和武汉中央决裂，背叛了革命走公开反共的道路。
武汉中央于14日向全世界发出通电，指出：“蒋介石的叛国行为已暴露无遗，吾人要求全党同志组织联合阵线，进行对抗叛国者。”
蒋既已和武汉中央决裂，就径直组建他的南京政府。4月17日，蒋召开中央政治会议，议决改国都为南京。18日南京国民政府正式成立并办公，声明“取消武汉中央党部和武汉国民政府”。选举胡汉民为南京国府主席。军委会和总政治部也相继成立。蒋仍任国民革命军总司令，吴稚辉任总政治部主任，陈铭枢任副主任。
同日，武汉中央开除蒋的党籍，罢免其一切职务，并对蒋明令通缉。南京政府则通缉鲍罗廷和一百九十七名中共党人。
这时的南京政府，仍是不合法的，因为中央执行委员远不到三分之一的数目。这实质上是个军人政变政府。
在南京政府成立人典上，蒋说中共是钻进铁扇公主肚子里的孙悟空，如不将其消灭，就必将自取灭亡，受制于异族。蒋指责苏联为赤色帝国主义者；英美为白色帝国主义者。
蒋还专门为他的反共行为在《告民众书》里做了详细说明。从八个方面分析、表白，其主要理由是：中共没有遵行容共政策中的接受三民主义的规定；要篡夺中国围民党党权；离间国民革命军；武汉中央军事学校分校对不附和他们的学生就关紧闭；宣传阶级斗争；把持饷源，不供给前线等等，等等，还有，就是中共反对他蒋介石，就是反对国民革命军总司令。他用这些理由，说服了那些迷惑不解的年轻军人。
4月12日反共政变者蒋介石成为全国乃至世界赫赫有名的新闻人物。他立即赶赴上海西摩路拜见宋美龄，表示爱慕之意。此时的宋美龄也已对蒋倾动芳心，此后，蒋经常赴宋宅与这位宋三小姐谈情说爱，惹得好事记者们也跟踪而至。
第一次下野
南京政府成立后，上海财团又给蒋七百万元贷款。5月1日，蒋下达继续北伐令。分兵三路：
第一路为何应钦，待第二路军在皖省北渡成功后，从镇江渡江，沿大运河直趋鲁南。
第二路为蒋亲领，由白崇禧代行。5月中旬自皖省渡过长江，于江北分三路进军。一路向东协助何应钦；一路向西，另一路向北，策应第三路军，扫荡皖北。
第三路军为李宗仁，率部直指徐州。
当时，蒋介石曾派张群赴扬州见孙传芳，邀孙到南京会谈，提议如孙改挂青天白日旗，即请孙任国民革命军副总司令，兼华北联军总司令；蒋兼华南联军总司令。但孙不识时务，拒绝了蒋的提议，其实孙无非想东山再起，准料想，后竞于天津当寓公，死于仇人之手。
李宗仁手6月2日攻克徐州，继入鲁西南。第二路军5月23日占领扬州，孙传芳总部撤离。6月中旬，三路军会师陇海
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